金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。

中文名：金黄色葡萄球菌

外文名：Staphylococcus aureus

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生，比如2001年4月12日，无锡市锡山区所辖小学、幼儿园因课间加餐饮用袋装牛奶饮料导致食物中毒事件。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：

a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死

b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞

c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关

d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌

e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C1、C2、C3、D、E及F八种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

f .表皮剥脱毒素：引起烫伤样皮肤综合征，又称剥脱样皮炎。

g.毒性休克综合征毒素（tsst-1）

金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。呕吐常在发热前出现，发热很高。轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频繁，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。体液损失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌。大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断。

第一，金黄色葡萄球菌的检验

样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。

增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。

分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。

染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5~1μm。

血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。

第二，金黄色葡萄球菌肠毒素检测

金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。

第一，防止金黄色葡萄球菌污染食品

防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生 产。

第二，防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成

应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。

第三，杀死金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌对热和干燥的抵抗力较一般无芽胞细菌强，加热80℃30分钟才被杀死。 物体表面覆盖一层0.1mg/cm3浓度的超细tio2在光照条件下可快速有效杀灭。在干燥的脓汁、痰液中可存活2～3月。5%石炭酸中10～15分钟死亡。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。

由于MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌） 的存在，一般不使用青霉素。所以有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。

治疗事项

1、毛囊炎治疗要注意饮食，不要吃辛辣刺激性食物，不能喝酒。

2、不可用手搔抓患处，以防继发感染。

3、待症状完全消失以后，巩固1个疗程。

卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》（GB19295－2011）。在几大速冻品牌食品因检出金黄色葡萄球菌而下架的背景下，因有条件允许金葡菌限量存在，新国标引来议论纷纷。卫生部专家称，新国标更加科学合理，并没有降低要求。

这个新国标是根据《食品安全法》及其实施条例规定，由卫生部在原《速冻预包装面米食品卫生标准》（GB19295－2003）实施基础上组织制定的，将于2011年12月21日起正式施行。

一般来说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。

甘露醇高盐琼脂可用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养

蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；D—甘露醇为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；酚红为pH指示剂。

1、材料

①培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作）

②试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4）

③器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器，

④实验动物：健康的小白鼠

2、方法

待检样品25g+225ml 灭菌生理盐水

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直接计数法 增菌培养方法

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Baird-Parker琼脂平板 7.5%NaCl肉汤培养基

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血平板 血平板

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涂片染色镜 溶血观察　动物接种试验 血浆凝固试验

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报告

实验步骤

1、样品的采集

称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于250ml 锥形瓶中，加入225ml 灭菌生理盐水，制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随机取10ml 离心。

2、增菌及分离培养

①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。

②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h。之后分别对3个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。转接入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。

3、涂片、染色与镜检

将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。

4、生化实验

①触酶试验

在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。

②血浆凝固酶试验

吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。

5、动物感染实验

用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观察其症状。对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料，进行分离。

结果与分析

1、培养特性及形态特征

①培养特性

在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。

②镜检结果

显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。

2、菌落计数报告

将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。

3、动物感染试验

只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。

“金球菌”列为“极重要质量项目”

金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争议，在2011年12月21日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌从原来“不得检出”变为“限量检出”，但这一检测标准的改变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。

在市质监局征集意见而公示的抽检项目中查询到，对包括速冻水饺、汤圆、包子、花卷、馒头、南瓜饼、八宝饭等在内的速冻米面食品，仍然计划把金黄色葡萄球菌列入A类检验项目，并标注为“极重要质量项目”，同时速冻米面食品的沙门氏菌也是A类检验。

产品检出“金球菌”属严重不合格

市质监局介绍，速冻面米抽检中，金黄色葡萄球菌也是A类检验项目。如果食品检验项目中任一项或一项以上不符合规定的要求，判定为不合格；当产品存在A类项目不合格时，属于严重不合格；仅有B类项目不合格，属于一般不合格。

同时，在婴幼儿奶粉、蛋制品中，三聚氰胺、苏丹红也是同样的A类。为避免一些肉禽食品可能含瘦肉精，此次在肉禽罐头食品中，还有专门针对瘦肉精的检测。

速冻食品“金球菌”可限量检出

中国现行《速冻预包装面米食品卫生标准》（GB19295－2003）规定金黄色葡萄球菌等致病菌不得检出。

而卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》，将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量，规定每批产品抽检5个样品中，至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。